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特异性是评估抗体质量最重要的指标之一。在国际抗体验证工作组(International Working Group for Antibody Validation, IWGAV)提出的验证抗体质量的五种方案中,基因工程方法被认为是验证抗体特异性的最佳方案。基因工程方法包括在DNA水平上的基因敲除(Knockout,KO)和mRNA水平上的基因沉默或敲低(knockdown,KD)。基因敲除可以导致基因编码的蛋白完全消除,但对于一些细胞生长必需的基因,敲除后会导致细胞死亡,这不利于下一步的抗体验证。善本生物特有的shGE™基因沉默平台通过慢病毒载体将特定基因的shRNA序列整合到细胞基因组中,通过shRNA的稳定表达下调mRNA以及mRNA编码的蛋白质。和KO相比,KD可以在不同程度上下调基因表达,避免了KO带来的细胞致死效应,便于我们验证那些对细胞生存至关重要基因所对应的抗体。作为shGE™基因沉默平台的补充,善本生物的shGE™基因敲除平台也可以高效的敲除基因,用来验证抗体的特异性。

 

验证原理:如果某个抗体在野生型(WT)细胞或其细胞裂解物中能检测到信号,而在基因敲除沉默的细胞或其细胞裂解物中信号消失或大幅减弱,则该抗体被认为特异性高

  • 特异性高:非特异性抗体不仅会大大增加试错成本,浪费时间和资源,更重要的是使实验结果无法解释和重复;我们KD或KO验证的抗体,特异性可达100%。

 

  • 多重验证:我们不仅通过WB验证抗体的特异性,也会通过细胞染色和流式细胞术等方法验证抗体特异性。

 

  • 批间误差小:我们经过验证的高特异性抗体多为重组兔单克隆抗体或鼠单克隆抗体,抗体质量批间一致性高。